【产品简介】

潮霉素B（Hygromycin B）是由吸水链霉菌代谢产生的一种氨基糖苷类抗生素，通过干扰70S核糖体易位和诱导对mRNA模板的错读而抑制蛋白合成，从而杀死原核（如细菌）、真核（如酵母菌，真菌）、植物和高等哺乳动物真核细胞。

大肠杆菌来源的潮霉素抗性基因（hyg或hph），编码潮霉素B磷酸转移酶，将潮霉素B转化成不具有生物活性的磷酸化产物，从而起到解毒作用。针对这一原理，潮霉素B是用来筛选和维持培养成功转染潮霉素抗性基因的原核或者真核细胞。另外，由于作用模式的差异，常与G418(GeneticinTM)，Zeocin和Blasticidin S联合使用进行双抗性阳性细胞株的选择。因潮霉素B选择性渗透进入因病毒感染增强通透性的细胞，且具有抑制翻译的功效，还能用作抗病毒剂。还可混合入动物饲料中起到驱虫功能。

【产品成分与配方】

成分                                 用量

潮霉素B                              1g

无菌UP水                           补水至20ml

【使用方法】

1.工作浓度的筛选

潮霉素B用来筛选的工作浓度需要根据细胞类型，培养基，生长条件和细胞代谢率而变化，推荐使用浓度为50-1000ug/ml。对于第一次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线(kill curve)，即剂量反应性曲线，来确定最佳筛选浓度。一般而言，哺乳动物细胞50-500ug/ml；细菌/植物细胞20-200ug/ml；真菌300-1000ug/ml。

2.杀灭曲线的建立

通过建立杀灭曲线(剂量反应曲线)，确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素最低浓度，从而筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株。建立杀灭曲线至少选择5个浓度。

（1）按照20-25%的细胞密度将未转化的细胞铺在合适的培养板上，37°C，CO2过夜培养(需要更高密度，可增加接种量)。

（2）根据细胞类型，设定合适的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例，可设定50，100，250，500，750，1000g/ml。

（3）第2天换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基，每个浓度做三个平行孔。

（4）接下来每3-4天更换新的含药物培养基。

（5）按照每2天进行活细胞计数，来确定杀灭未转染细胞的恰当浓度。通常7-10天内能够杀死绝大多数细胞的最低浓度为筛选用的工作浓度。

3.稳定转染细胞的筛选

（1）转染48h后，用含适当浓度的潮霉素B筛选培养基来传代细胞(直接传代或者稀释后传代)。

注意：细胞处于活跃分裂状态时抗生素的杀伤效果最好。但细胞过于稠密，其效率会降低，最好将细胞稀释至丰度低于25%。

（2）每隔3-4天更换含有药物的筛选培养液。

（3）筛选7天后观察并评估细胞克隆(集落)的形成情况。集落的形成可能还需要一周或者更多的时间(取决于宿主细胞类型，转染，以及筛选效果)。

（4）挑取并转移5-10个抗性克隆于35mm细胞培养板，继续用含药物的筛选培养液维持培养7天。

（5）后续更换正常培养基培养即可。

【保存条件】2-8℃保存12个月，密封保存，防止污染。

【注意事项】

1.潮霉素B不能高压灭菌；

2.潮霉素B的抗性基因 (hyg 或 hph)米自E. Coli.,Streptomyces hygroscopicus 和 Klebsiella pneumoniae。