培养基为什么会出现沉淀？

细胞培养是每个实验人员的必备技能，俗话说：细胞养得好，实验没烦恼，然而事实却是，实验室的小细胞们经常容易“生病”，别人的培养基粉红透亮，细胞长势喜人，而自己在细胞培养中却经常出现各种不明原因的浑浊和沉淀，这是什么情况呢?

一、细胞本身被污染

细菌、真菌和酵母污染，在这三种污染中，细菌污染是三者之中个性较强的一位，有一定的辨别难度，常见的细菌有：杆状菌、球状菌和螺旋状菌；

支原体可是细胞的天敌，这是因为支原体的平均直径只有 0.1~0.3 µm ，这在显微镜下都无法识别，常用的检查方法为培养检测法，即取1mL细胞培养液加入支原体液体培养基中，培养5天后，观察培养基的颜色变化：如果变黄则怀疑该细胞受到支原体污染，如果不变色，则盲传一代；

真核细胞污染是指一个细胞系中混入了其它细胞，由于各种细胞的外形大小差异甚微，这种污染同样很难被识别。

二、水的影响

灭菌前加热溶解过程中出现难溶物，这可能是水质不佳（偏酸或偏碱或含有容易形成难溶物质的金属离子），多数培养基的制备需要使用纯化水、去离子水配制，而天然水中含有较多的矿物盐离子，若错误的使用了自来水，矿泉水配制，或使用的纯化水离子未除净，都有可能导致培养基灭菌后岀现浑浊现象或沉淀；

失水诱导的浓度改变:如果培养基可能蒸发，培养基组分(包括盐) 的浓度将会增加，特别是培养基表面可能容易形成晶体沉淀。

三、培养基组分的影响

制备无血清培养基时，组分添加的顺序可能导致不可溶分子的形成。钙盐尤其容易沉淀，比如CaCl2和MgSO4在溶液中反应产生CaSO4晶体。

铜、铁和锌等金属离子是细胞生长所必需的，是无血清培养基的重要补充物。培养系统中其他血清组分的缺失可能导致这些金属沉淀，为细胞形成有毒的环境，在氧化条件下，铜和锌更易于沉淀。

四、培养基pH不正确

偏酸或偏碱的pH有可能使培养基中的部分金属离子产生沉淀。

五、容器不干净

新开封的容器或容器清洗不干净，内壁留有杂质，都会导致灭菌后的培养基中有杂质出现。

六、培养基本身有沉淀

培养基配方中无机盐成分较多，或培养基本身含有不溶性成分，灭菌后会有沉淀存在，此为正常现象，不影响使用。例如MC、TTB、BS等，配方中含有不溶物，灭菌后有沉淀。

七、溶解不充分

培养基灭菌前应充分搅拌至完全溶解，方可进行灭菌。若灭菌前未将培养基溶解完全就进行灭菌处理，灭菌后易出现絮状或团块状沉淀，如 Fraser培养基含有大量磷酸盐，若灭菌前未进行充分溶解，灭菌过程中磷酸盐易结成块灭菌后不溶解。

八、灭菌方式不正确或灭菌过度

灭菌前不经过加热溶解过程而是直接灭菌，灭菌过程中某些成分局部浓度过高也会发生化学反应生成难溶性物质；

再有一种情况：含有不耐热成分的培养基，若灭菌过度或加热过度，都有可能导致灭菌后的培养基颜色不正确或岀现沉淀。如亚硒酸氢钠胱氨酸増菌液(SC)，正常制备好的培养基应为淡黄色透明液体，澄凊无沉淀，若加热过度则培养基中亚硒酸氢钠分最终制备的培养基会出现红色沉淀。

九、添加剂加入时温度不正确

在细胞培养中，温度是引起沉淀的主要因素之一。当遭遇温度的极端变化时，高分子量血浆蛋白会从溶液中析出;

卵黄、血液等对温度敏感的添加成分，若加入时温度过高或温差过大，易出现凝块或絮状沉淀。

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