培养基如何选择
很多科研老师向我们反映,在选购培养基时发现各类培养基产品琳琅满目,不知如何选择。造成这一选择困难的很大原因是对培养基这类产品的分类不清楚。由于培养基产品有多个分类维度,所以很容易出现不同分类维度概念之间的嵌套交杂,使得老师陷入选择困难。
高效准确的选择适合自己实验的培养基,前提是对培养基的分类有清晰的认识,形成准确的分类逻辑框架。
一:相关基础概念
(一)什么是培养基?
培养基,是指供给微生物、植物或动物(或组织)生长繁殖的,由不同营养物质组合配制而成的营养基质。
(二)培养基一般含有哪些成分?
一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐(包括微量元素)、生长因子(维生素、氨基酸、碱基、抗菌素、色素、激素和血清等)和水等几大类物质。
(三)培养基的作用?
培养基既是提供细胞营养和促使细胞增殖的基础物质,也是细胞生长和繁殖的生存环境。
二、培养基分类详解
(一)根据配制原料分类
根据配制原料分类 |
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分类 |
来源 |
特点 |
示例 |
天然培养基 |
利用动物、植物或微生物体(包括其提取物)制成 |
难以确切知道其化学成分,但一般营养丰富,微生物生长旺盛,而且来源广泛,配制方便,所以较为常用,尤其适合于配制实验室常用的培养基和大生产上的培养基。稳定性常受生产厂或批号等因素的影响。 |
肉膏蛋白胨培养基、麦芽汁培养基、LB培养基 |
合成培养基 |
根据天然培养基的成分,用化学物质模拟合成、人工设计而配制 |
用已知化学成分的化学药品配制而成,化学成分精确、重复性强,但价格昂贵,而微生物又生长缓慢,适用于做一些科学研究,例如营养、代谢的研究。 |
高氏1号培养基 查氏培养基 |
半合成培养基 |
主要以化学试剂配制,同时还加有某种或某些天然成分 |
在合成培养基中,加入某种或几种天然成分;或者在天然培养基中,加入一种或几种已知成分的化学药品即成半合成培养基。 |
马铃薯蔗糖培养基 |
(二)根据物理形态分类
根据物理形态分类 |
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分类 |
特点 |
用途 |
示例 |
固体培养基 |
在培养基中加入凝固剂,有琼脂、明胶、硅胶等。 |
常用于微生物分离、鉴定、计数和菌种保存等方面。 |
用于分离微生物的固体培养基 |
半固体培养基 |
在液体培养基中加入少量凝固剂而呈半固体状态。 |
可用于观察细菌的运动、鉴定菌种和测定噬菌体的效价等方面。 |
用于观察微生物运动特征的半固体培养基 |
液体培养基 |
不加任何凝固剂。成分均匀,微生物能充分接触和利用培养基中的养料。 |
适于作生理等研究,由于发酵率高,操作方便,也常用于发酵工业。 |
用于观察微生物生长状态的液体培养基 |
(三)根据营养成分分类
根据营养成分分类 |
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分类 |
特点 |
应用 |
常用表示 |
基本培养基(最低限度培养基) |
只能保证某些微生物的野生型菌株正常生长,是含有营养要求最低成分的合成培养基。 |
往往缺少某些生长因子,所以经过诱变过的营养缺陷型菌株不能生长。 |
“[-]” |
完全培养基(血清细胞培养基) |
基本培养基中加入血清、富含氯基酸、维生素和碱基之类的天然物质(如酵母浸出物、蛋白胨等),即加入生长因子而成完全培养基。 |
可用来满足微生物的各种营养缺陷型菌株的生长需要。 |
“[+]” |
补充培养基 |
往基本培养基中有针对性加进某一种或某几种该菌株不能合成的营养因子而组成。 |
满足相应的营养缺陷型菌株生长的需要。 |
常用某种成分如“[A]”、“[B]”表示 |
(四)根据微生物种类分类
根据微生物种类分类 |
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分类 |
示例 |
细菌培养基 |
营养肉汤、营养琼脂培养基 |
放线菌培养基 |
高氏1号培养基 |
酵母菌培养基 |
马铃薯蔗糖培养基、麦芽汁培养基 |
霉菌培养基 |
马铃薯蔗糖培养基、豆芽汁蔗糖琼脂培养基、察氏培养基 |
(五)根据用途分类
根据用途分类 |
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分类 |
特点 |
基础培养基 |
含有一般微生物生长繁殖所需基本营养物质(如牛肉膏蛋白胨)。 |
加富培养基 |
在基础培养基中加入血、血清、动植物组织提取液制成的培养基。用于培养要求比较苛刻的某些微生物。 |
选择培养基 |
在普通培养基中加入特殊营养物质或化学物质,以抑制不需要的微生物的生长,有利于所需微生物的生长。用于将某种或某类微生物从混杂的微生物群体中分离出来。 |
鉴别培养基 |
在培养基中加入某种试剂或化学药品,使培养后会发生某种变化,从而区别不同类型的微生物。(如鉴别大肠杆菌的伊红美蓝培养基,鉴别纤维素分解菌的刚果红培养基。) |
*1 选择培养基示例
培养基 |
用途 |
原因 |
加入青霉素 |
分离酵母菌,霉菌等真菌 |
青霉素仅作用于细菌,对真菌无作用 |
加入高浓度食盐 |
分离金黄色葡萄球菌 |
金黄色葡萄球菌细胞壁结构致密,且能分泌血浆凝固酶,分解纤维蛋白原为纤维蛋白,沉积在细胞壁表面形成很厚的一层不透水的膜,不易失水 |
不加氮源 |
分离固氮菌 |
固氮菌能利用空气中的氮气,其他菌类不行 |
不加含碳有机物 |
分离自养型微生物 |
自养型微生物可利用无机碳源,异养型微生物不行 |
加入青霉素等抗生素 |
分离导入了目的基因的受体细胞 |
导入了目的基因的受体细胞中含有标记基因,对特定抗生素有抗性 |
加入氨基喋呤,次黄嘌呤,胸腺嘧啶核苷酸 |
分离杂交瘤细胞 |
上一步得到的细胞中,仅有杂交瘤细胞能完成DNA复制,正常进行细胞分裂,其他细胞的DNA复制过程被阻断无法进行分裂 |
*2 鉴别培养基示例
伊红美蓝培养基用于鉴别大肠杆菌。大肠杆菌菌落表面反光,有金属光泽。
三、培养基保管注意事项
1. 培养基配成后一般需测试并调节pH,还须进行灭菌,通常有高温灭菌和过滤灭菌。
2.培养基由于富含营养物质,易被污染或变质。配好后不宜久置,最好现配现用。
3.一般培养基在受热、吸潮后,易被细菌污染或分解变质,因此一般培养基必须防潮、避光、阴凉处保存。
4.对一些需严格灭菌的培养基(如组织培养基),较长时间的贮存,必须放在3-6℃的冰箱内。由于液体培养基不易长期保管,需制成粉末。