蛋白酶抑制剂Cocktail (不含EDTA, 100X in DMSO液体)
Protease inhibitor cocktail for general use, without EDTA, 100X
牌号和规格 | 网点 | 货期/库存 | 包装规格 | 牌价(CNY) | 折扣价(CNY) |
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JF0103-1mL | 涿州仓 | 3天 | 1mL | ¥ 417.00 | ¥ 417.00 |
JF0103-1x10mL | 涿州仓 | 3天 | 1x10mL | ¥ 2457.00 | ¥ 2457.00 |
产品介绍
当在体外从细胞和组织中提取蛋白时,粗细胞提取物含有许多能够降解目的蛋白的内源酶,例如磷酸酶和蛋白酶。这些酶从细胞内释放出来或被激活,导致目的蛋白分解,影响分析结果。为了避免这种情况的出现,提高目的蛋白产量的最佳方法是加入相关酶的抑制剂。该蛋白酶抑制剂组分清晰,浓度明确,cocktail由6个成分组成,包括对半胱氨酸、丝氨酸、天冬氨酸蛋白酶和氨基肽酶具有广泛特异性的 AEBSF、Aprotinin、Bestatin、E-64、Leupeptin 和Pepstatin A,不含 EDTA,产品兼容性好,高效抑制多种蛋白酶,全面保护蛋白不被降解。
已经用哺乳动物细胞和组织提取物对该蛋白酶抑制剂 cocktail 进行了优化和测试,具有高效抑制自动物、植物、细菌、酵母、真菌样品中的丝氨酸蛋白酶,半胱氨酸蛋白酶及金属蛋白酶在内的多种蛋白酶,方便可靠地保护您的蛋白。
产品应用
1、本产品适用于Western Blot, Co-IP, pull-down, IF, IHC, kinase assay等实验。
2、在室温下解冻(DMSO在低温下融化较慢,建议在25°C下融化),开盖前请低速离心一下,以便将黏附于管壁的液体甩至管底。然后在您的实验体系中,按照1:100 的比率(体积比体积)将抑制剂cocktail加入到样品溶液中(比如细胞 裂解液或者组织抽提物)。按照建议的用量,一管产品可以抑制20g 湿重的细胞得到的提取物中的蛋白酶。
组分浓度
成分 |
浓度 |
靶点 |
类型 |
AEBSF |
104 mM |
Serine proteases |
Irreversible |
Aprotinin |
80 μM |
Serine proteases |
Reversible |
Bestatin |
5 mM |
Aminopeptidases |
Reversible |
E-64 |
1.5 mM |
Cysteine proteases |
Irreversible |
Leupeptin |
2 mM |
Serine and cysteine proteases |
Reversible |
Pepstatin A |
1.5 mM |
Aspartic proteases |
Reversible |
储存条件:
-20 ℃,避免反复冻融。
Q & A:
Q问题1:为什么要用蛋白酶抑制剂Cocktail?
A回答:蛋白酶抑制剂Cocktail是低毒,全面的蛋白保护试剂,最大限度地保护蛋白,使其免于被蛋白酶降解。目前生物学研究日渐深入,更多地将目标锁定为细胞中较为微量的蛋白,如信号通路蛋白、受体蛋白,采用coIP,Pull-down等方法获得样品。对于这些微量的珍贵样品,Cocktail能取得最佳的保护效果,比单一的抑制剂(如PMSF)更为可靠。
Q问题2:蛋白酶抑制剂Cocktail能否稀释使用?
A回答:蛋白酶活性抑制效果和很多因素有关,如目标蛋白降解的难易程度、蛋白酶的浓度、活性、抑制剂的浓度都会影响最后的保护效果。我们的蛋白酶抑制剂Cocktail采用经典浓度配比,确保对不同类型的蛋白酶都有充分的抑制效果。为了取得最好的保护效果,使用时应按照规定比例稀释,这是此类产品的共性。
Q问题3:实验中经常用PMSF来保护蛋白,蛋白酶抑制剂Cocktail和它比有什么优势?
A回答:PMSF是经典的丝氨酸蛋白酶抑制剂,以前被广泛应用于细胞裂解纯化蛋白过程。但由于PMSF在很多方面存在明显的缺点,逐步被保护效果更好、更安全的蛋白酶抑制剂Cocktail所取代。PMSF的毒性较高,因此在蛋白酶抑制剂中选用AEBSF作为其替代品。AEBSF的半致死量是2834mg/kg,而PMSF是200mg/kg,AEBSF安全域值超过PMSF十四倍多,同时有着相当的抑制效果,对于很多丝氨酸蛋白酶的抑制比PMSF更为迅速。PMSF的另一个缺点是易降解失效,它在水溶液中的半衰期是30min,在细胞裂解过程中很容易失效。而蛋白酶抑制剂Cocktail不但保护更加全面,而且效果更加持久。
Q问题4:我应该选择哪种类型的蛋白酶抑制剂cocktail, 片剂还是溶液?
A回答:在选择cocktail产品类型的时候我们需要注意一些细节问题。两种类型的产品都含有添加物。片剂中含有若干种公司专利的未经公开的医药成分, 而溶液型产品中含有溶剂成分DMSO。一般来说这些添加物是不会影响产品效果的。在工业生产中,溶液型产品较片剂来说需要的加工步骤少,因而质量好价格低。而片剂产品在储存和运输两个环节具有优势,片剂能够在4度储存而不需要零下20度。
Q问题5:DMSO会不会对我的实验造成影响?
A回答:DMSO会影响实验结果的可能性很低。在生物科学领域,DMSO被作为很多生物活性物质的溶剂,比如蛋白结晶和免疫共沉淀等要求较高的实验体系中DMSO也有应用。DMSO在室温下性质稳定,在低温条件下DMSO还是优秀的细胞冷冻保护剂。
Q问题6:用了Cocktail,结果仍然不好是怎么回事?
A回答:蛋白酶抑制剂Cocktail作用是保护蛋白免受蛋白酶降解威胁,提高蛋白得率。对于绝大多数蛋白,Cocktail都有很好的效果。如果还是出现蛋白得率低的情况,需要谨慎检查实验步骤和方案设计,最大限度发挥Cocktail作用,减少导致蛋白降解的环节。例如,细胞处理前,先要将裂解体系完全准备好,预先加入Cocktail并混匀,将要破碎的细胞,收集完后或从冰箱中取出后立即加入准备好的裂解液中,给予蛋白全程保护。