产品介绍

当在体外从细胞和组织中提取蛋白时，粗细胞提取物含有许多能够降解目的蛋白的内源酶，例如磷酸酶和蛋白酶。这些酶从细胞内释放出来或被激活，导致目的蛋白分解，影响分析结果。为了避免这种情况的出现，提高目的蛋白产量的最佳方法是加入相关酶的抑制剂。该蛋白酶抑制剂组分清晰，浓度明确，cocktail由6个成分组成，包括对半胱氨酸、丝氨酸、天冬氨酸蛋白酶和氨基肽酶具有广泛特异性的 AEBSF、Aprotinin、Bestatin、E-64、Leupeptin 和Pepstatin A，不含 EDTA，产品兼容性好，高效抑制多种蛋白酶，全面保护蛋白不被降解。

已经用哺乳动物细胞和组织提取物对该蛋白酶抑制剂 cocktail 进行了优化和测试，具有高效抑制自动物、植物、细菌、酵母、真菌样品中的丝氨酸蛋白酶，半胱氨酸蛋白酶及金属蛋白酶在内的多种蛋白酶，方便可靠地保护您的蛋白。

产品应用

1、本产品适用于Western Blot, Co-IP, pull-down, IF, IHC, kinase assay等实验。

2、在室温下解冻（DMSO在低温下融化较慢，建议在25°C下融化），开盖前请低速离心一下，以便将黏附于管壁的液体甩至管底。然后在您的实验体系中，按照1：100 的比率(体积比体积)将抑制剂cocktail加入到样品溶液中(比如细胞  裂解液或者组织抽提物)。按照建议的用量，一管产品可以抑制20g 湿重的细胞得到的提取物中的蛋白酶。

组分浓度

储存条件：

-20 ℃，避免反复冻融。

Q & A：

Q问题1：为什么要用蛋白酶抑制剂Cocktail？

A回答：蛋白酶抑制剂Cocktail是低毒，全面的蛋白保护试剂，最大限度地保护蛋白，使其免于被蛋白酶降解。目前生物学研究日渐深入，更多地将目标锁定为细胞中较为微量的蛋白，如信号通路蛋白、受体蛋白，采用coIP，Pull-down等方法获得样品。对于这些微量的珍贵样品，Cocktail能取得最佳的保护效果，比单一的抑制剂（如PMSF）更为可靠。

Q问题2：蛋白酶抑制剂Cocktail能否稀释使用？

A回答：蛋白酶活性抑制效果和很多因素有关，如目标蛋白降解的难易程度、蛋白酶的浓度、活性、抑制剂的浓度都会影响最后的保护效果。我们的蛋白酶抑制剂Cocktail采用经典浓度配比，确保对不同类型的蛋白酶都有充分的抑制效果。为了取得最好的保护效果，使用时应按照规定比例稀释，这是此类产品的共性。

Q问题3：实验中经常用PMSF来保护蛋白，蛋白酶抑制剂Cocktail和它比有什么优势？

A回答：PMSF是经典的丝氨酸蛋白酶抑制剂，以前被广泛应用于细胞裂解纯化蛋白过程。但由于PMSF在很多方面存在明显的缺点，逐步被保护效果更好、更安全的蛋白酶抑制剂Cocktail所取代。PMSF的毒性较高，因此在蛋白酶抑制剂中选用AEBSF作为其替代品。AEBSF的半致死量是2834mg/kg，而PMSF是200mg/kg，AEBSF安全域值超过PMSF十四倍多，同时有着相当的抑制效果，对于很多丝氨酸蛋白酶的抑制比PMSF更为迅速。PMSF的另一个缺点是易降解失效，它在水溶液中的半衰期是30min，在细胞裂解过程中很容易失效。而蛋白酶抑制剂Cocktail不但保护更加全面，而且效果更加持久。

Q问题4：我应该选择哪种类型的蛋白酶抑制剂cocktail， 片剂还是溶液？

A回答：在选择cocktail产品类型的时候我们需要注意一些细节问题。两种类型的产品都含有添加物。片剂中含有若干种公司专利的未经公开的医药成分， 而溶液型产品中含有溶剂成分DMSO。一般来说这些添加物是不会影响产品效果的。在工业生产中，溶液型产品较片剂来说需要的加工步骤少，因而质量好价格低。而片剂产品在储存和运输两个环节具有优势，片剂能够在4度储存而不需要零下20度。

Q问题5：DMSO会不会对我的实验造成影响？

A回答：DMSO会影响实验结果的可能性很低。在生物科学领域，DMSO被作为很多生物活性物质的溶剂，比如蛋白结晶和免疫共沉淀等要求较高的实验体系中DMSO也有应用。DMSO在室温下性质稳定，在低温条件下DMSO还是优秀的细胞冷冻保护剂。

Q问题6：用了Cocktail，结果仍然不好是怎么回事？

A回答：蛋白酶抑制剂Cocktail作用是保护蛋白免受蛋白酶降解威胁，提高蛋白得率。对于绝大多数蛋白，Cocktail都有很好的效果。如果还是出现蛋白得率低的情况，需要谨慎检查实验步骤和方案设计，最大限度发挥Cocktail作用，减少导致蛋白降解的环节。例如，细胞处理前，先要将裂解体系完全准备好，预先加入Cocktail并混匀，将要破碎的细胞，收集完后或从冰箱中取出后立即加入准备好的裂解液中，给予蛋白全程保护。